Deteksi Aeromonas hydrophila Secara Molekuler Pada Ikan Mas yang diberi Pakan Esktrak Bawang Putih

Iesie Liwisutowati. 2009. Deteksi Aeromonas hydrophila secara molekuler pada ikan mas (Cyprinus carpio L) yang diberi pakan ekstrak bawang putih (Allium sativum). Surat Perjanjian Pelaksanaan Penelitian Nomor LPPM-UGM/137/2009 tanggal 19 Mei 2009. Penelitian tentang deteksi Aeromonas hydrophila secara molekuler pada ikan yang diberi pakan ekstrak bawang putih merupakan rangkaian penelitian untuk melihat sejauh mana ikan yang diberi perlakuan selama 30 hari mampu bertahan terhadap serangan penyakit MAS dan pertahanan tubuhnya meningkat (pertahanan non-spesifik) setelah ikan tersebut diinfeksi secara intramuskuler dengan A. hydrophila. Penggunaan bawang putih telah banyak digunakan baik untuk mencegah maupun mengobati berbagai macam penyakit pada manusia, ikan, dan hewan lainnya. Penelitian ini dilakukan untuk melihat peran bawang putih sebagai peningkat pertahanan tubuh dan untuk mengetahui apakah pemberian bawang putih dapat meningkatkan pertahanan tubuh ikan (pertahanan non-spesifik) dilihat dari aktivitas fagositik sel darah putih (neutrofil) dan limfosit, serta aktivitas enzim lisosom. Untuk mendeteksi dalam tubuhnya masih ada A. hydrophila maka perlu dilakukan deteksi secara konvensional maupun secara molekuler pada organ target yaitu ginjal dengan menggunakan teknik PCR, dengan menggunakan primer oligonukleotida sintetis yaitu: forward primer (5’-CCAAGGGGCTCGTGCGCACA-3’) dan reverse primer (5’-TTCACCGGTACTAGGATGCGT-3’) (konsentrasi akhir 0,1 µM), yang bertujuan mendeteksi gen aerolysin dalam untaian-untaian Aeromonas hydrophila. Primer tersebut digunakan pada suhu annealing 45°C. Setelah dilakukan deteksi menggunakan PCR menunjukkan pada ikan kontrol negatif ikan dan perlakuan ekstrak bawang putih 2,5%, 5% menunjukkan adanya pita positif pada 454 bp, sedangkan pada perlakuan 10% gambarnya tidak jelas/menipis (–). Setelah dilakukan sekuensing dan perlakuan kontrol positif dan ikan yang diberi pakan yang mengandung ekstrak bawang putih 10% menunjukkan 79 situs berbeda dari 454 bp. Ikan yang diberi perlakuan ekstrak bawang putih dengan dosis 10% banyak bertahan hidup dibandingkan dengan kontrol dilihat dari kelulus hidupnya mencapai 80% diduga ketahanan tubuh meningkat terhadap serangan A. hydrophila disebabkan karena kandungan pakan yang mengandung bawang putih tersebut terutama alisin dan scordinin mampu meningkatkan pertahanan tubuh non-spesifik pada ikan. Kemudian setelah dilakukan PCR pada organ target yaitu ginjal menunjukkan hasil negatif dan secara konvensional bakteri yang diisolasi kembali dari bekas luka. Dari data sekuensing menunjukkan pola yang sama antara kontrol positif (1) dan perlakuan ekstrak bawang putih 10% (5) yaitu pada 454 bp.